又稱螯合劑,對(duì)一些組織,尤其是上皮組織分散效果好。與細(xì)胞上的鈣、鎂離子結(jié)合形成螯合物后,形成的機(jī)械力可使細(xì)胞分散。Q:細(xì)胞量太少,長(zhǎng)不起來(lái)怎么辦?A:有幾種辦法,如對(duì)沒消化完的組織塊反復(fù)消化,盡量多收集一些細(xì)胞;并且盡量傳代到小皿里,如6孔板都可以。若是細(xì)胞仍太少,應(yīng)耐心等待,盡量不要傳代,只換液。Q:細(xì)胞難以貼壁?A:盡快使接種的細(xì)胞貼壁,是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。為了盡快促進(jìn)細(xì)胞貼壁,可以提前1h將千分之的明膠鋪于培養(yǎng)板。Q:原代細(xì)胞培養(yǎng)方法與細(xì)胞系不同之處在哪里?A:培養(yǎng)基一般選用RPM1640,DMEM等,建議能加入促生長(zhǎng)的物質(zhì):如胰島素、氫化可的松、EGF等因子。二、原代正常組織分離皮膚是人體長(zhǎng)久以來(lái),表皮細(xì)胞一種被認(rèn)為是難以培養(yǎng)的細(xì)胞,限制了皮膚生物學(xué)基礎(chǔ)研究的發(fā)展。作為表皮的主要細(xì)胞,角質(zhì)形成細(xì)胞已經(jīng)成為我們了解皮膚生物學(xué)至關(guān)重要的許多原創(chuàng)性研究的焦點(diǎn)。下面就介紹下小鼠角質(zhì)形成細(xì)胞的分離和培養(yǎng)。基本過(guò)程如下圖:原代小鼠角質(zhì)細(xì)胞的分離步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果:分離出的小鼠角質(zhì)細(xì)胞常見問(wèn)題解答:Q:皮膚組織作為正常組織,組織分離主要區(qū)別在哪里?A:首先,皮膚組織需要用中性分離酶dispaseII將表皮分離出來(lái);其次。臍動(dòng)脈將胎兒來(lái)的廢物運(yùn)送至胎盤,臍靜脈將O2和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運(yùn)送給胎兒。云南模式原代細(xì)胞技術(shù)
pricells-原代細(xì)胞分離試劑盒ii分離試劑盒編號(hào):iso-ii分離試劑盒適用:各種人和哺乳動(dòng)物組織的骨骼肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞、肺組織細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及滑膜細(xì)胞的分離。分離試劑盒規(guī)格:1分離試劑盒價(jià)格:¥1980分離試劑盒產(chǎn)地:中國(guó),pricells分離試劑盒特征:不含有hiv、hbv、hcv、細(xì)菌、支原體、酵母;不含有;不含有苯;不含有血清。生物安全級(jí):1級(jí)。運(yùn)輸條件:4oc。儲(chǔ)存條件:4oc,避光。用途范圍:只可用于科研。原代細(xì)胞分離試劑盒ii產(chǎn)品說(shuō)明書一、主要適用骨骼肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞、肺組織細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及滑膜細(xì)胞。二、試劑盒組成1、buffera:100ml×24℃保存2、bufferb:50ml×24℃保存3、bufferc50ml×14℃保存4、bufferd:20ml×14℃保存5、buffere:20ml×14℃保存6、消化液i:2ml×24℃保存7、消化液ii:2ml×14℃保存三、使用方法注意:使用前請(qǐng)認(rèn)真閱讀說(shuō)明書,按說(shuō)明書的要求對(duì)試劑進(jìn)行妥善保存。本試劑盒供用于5次組織的原代細(xì)胞分離,每次分離的組織約1g。取消化液i放入50mlbufferb中,放4℃保存。用完后,再新鮮配制。消化液ii放入50mlbufferc中,放4℃保存。1、取組織重約1g,放入無(wú)菌培養(yǎng)皿中,取1×pbs()清洗組織。黑龍江裸鼠原代細(xì)胞構(gòu)建胞形態(tài):細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),呈現(xiàn)鋪路石狀鑲嵌排列,細(xì)胞為扁平多角形。
pricells-原代細(xì)胞分離試劑盒ii分離試劑盒編號(hào):iso-ii分離試劑盒適用:各種人和哺乳動(dòng)物組織的骨骼肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞、肺組織細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及滑膜細(xì)胞的分離。分離試劑盒規(guī)格:1分離試劑盒價(jià)格:¥1980分離試劑盒產(chǎn)地:中國(guó),pricells分離試劑盒特征:不含有hiv、hbv、hcv、細(xì)菌、支原體、、酵母;不含有內(nèi);不含有苯;不含有血清。生物安全級(jí):1級(jí)。運(yùn)輸條件:4oc。儲(chǔ)存條件:4oc,避光。用途范圍:只可用于科研。原代細(xì)胞分離試劑盒ii產(chǎn)品說(shuō)明書一、主要適用骨骼肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞、肺組織細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及滑膜細(xì)胞。二、試劑盒組成1、buffera:100ml×24℃保存2、bufferb:50ml×24℃保存3、bufferc50ml×14℃保存4、bufferd:20ml×14℃保存5、buffere:20ml×14℃保存6、消化液i:2ml×24℃保存7、消化液ii:2ml×14℃保存三、使用方法注意:使用前請(qǐng)認(rèn)真閱讀說(shuō)明書,按說(shuō)明書的要求對(duì)試劑進(jìn)行妥善保存。本試劑盒供用于5次組織的原代細(xì)胞分離,每次分離的組織約1g。取消化液i放入50mlbufferb中,放4℃保存。用完后,再新鮮配制。消化液ii放入50mlbufferc中,放4℃保存。1、取組織重約1g,放入無(wú)菌培養(yǎng)皿中,取1×pbs()清洗組織。
下端伸入瓶身13并與設(shè)于瓶身13內(nèi)的纖維板8固定連接,并且在活動(dòng)圓盤11和纖維圓盤12之間的連接桿5上套裝有彈簧4。本實(shí)施例中,所述活動(dòng)圓盤11的四周設(shè)有密封圈,或活動(dòng)圓盤11可采用類似注射器的密封橡膠塞,兼具密封和可活動(dòng)的性能本實(shí)施例中,所述彈簧4處于自然狀態(tài)或輕微壓縮狀態(tài)時(shí),活動(dòng)圓盤11與阻隔環(huán)3相接觸;在活動(dòng)圓盤11受壓時(shí),活動(dòng)圓盤11向下運(yùn)動(dòng),彈簧4壓縮,連接桿5向下并帶動(dòng)纖維板8一起向下,待壓力解除后,彈簧4伸張恢復(fù)并帶動(dòng)活動(dòng)圓盤11復(fù)位。本實(shí)施例中,所述纖維板8采用具有阻隔和透氣特性的柔性網(wǎng)格纖維材料制作;纖維板8整體被網(wǎng)格狀的纖維覆蓋,可根據(jù)需要定制不同目數(shù)的網(wǎng)格纖維。本實(shí)施例中,所述外接圓柱1的直徑為2cm,正壓口2的直徑為5mm,并可采用肝素帽封閉;活動(dòng)圓盤11和纖維圓盤12的直徑為。本實(shí)施例中,所述加樣口6為直徑,該開口可通過(guò)螺紋連接透氣瓶蓋,爬片瓶頸7為類棱柱狀,根據(jù)爬片組織大小可定制25cm2和75cm2底面積,所述瓶身13底部的四個(gè)角還設(shè)置有8個(gè)直角三角支架10。本一體式原代細(xì)胞爬片培養(yǎng)瓶的實(shí)驗(yàn)操作流程如下:一、器材準(zhǔn)備無(wú)菌鑷,無(wú)菌剪,胎牛血清,細(xì)胞培養(yǎng)基,胰蛋白酶,膠原酶(根據(jù)需求選用),70%醫(yī)用酒精,燒杯,無(wú)菌pbs。本公司分離的SD大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞取自新鮮的組織材料,并且按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程進(jìn)行原代細(xì)胞的分離和培養(yǎng)。
本實(shí)用新型涉及細(xì)胞培養(yǎng)箱領(lǐng)域,尤其涉及的是一種新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱。背景技術(shù):現(xiàn)有技術(shù)中,原代培養(yǎng),是指由體內(nèi)取出組織或細(xì)胞進(jìn)行的培養(yǎng),也叫初代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)離體時(shí)間短,遺傳性狀和體內(nèi)細(xì)胞相似,適于做細(xì)胞形態(tài)、功能和分化等研究。較為嚴(yán)格地說(shuō)是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),如果是正常細(xì)胞,仍然保留二倍體數(shù)。但實(shí)際上,通常把代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。利用原代培養(yǎng),可對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行藥物的篩選,根據(jù)細(xì)胞對(duì)加入的化療藥物的敏感性來(lái)幫助選擇的化療方案,有可能起到增強(qiáng)療效、降低副作用的作用。而實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,為得到更多的細(xì)胞進(jìn)行篩查,往往需要同時(shí)對(duì)大量的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),而市面上單層或雙層設(shè)計(jì)的細(xì)胞培養(yǎng)箱已難以滿足實(shí)驗(yàn)者的需求,另外市面上也有一些原代細(xì)胞培養(yǎng)箱,但其儲(chǔ)藏空間設(shè)計(jì)不合理,空間利用率低,在存放大量的細(xì)胞培養(yǎng)皿時(shí),其占地面積也大,不方便實(shí)驗(yàn)者存放。同時(shí),無(wú)毒和無(wú)菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件,培養(yǎng)皿作為用于細(xì)胞培養(yǎng)的主要實(shí)驗(yàn)室器皿,常存儲(chǔ)于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行貯藏培養(yǎng),市場(chǎng)上的大型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱由于空間設(shè)計(jì)過(guò)大。請(qǐng)與我方溝通該組織的取材部分、要求、儲(chǔ)存及運(yùn)輸條件,以方便原代細(xì)胞取材,保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。兔原代細(xì)胞
采用波形蛋白(Vimentin)免疫熒光染色鑒定,結(jié)果顯示波形蛋白(Vimentin)免疫熒光染色鑒定呈現(xiàn)陽(yáng)性。云南模式原代細(xì)胞技術(shù)
具體實(shí)施方式以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例,對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。如圖1至圖5所示,一種新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱,包括若干個(gè)用于存放細(xì)胞培養(yǎng)皿的內(nèi)箱盒2、及用于存放所述內(nèi)箱盒的外箱體1,所述外箱體1內(nèi)設(shè)有若干列中空的矩形槽11,各所述矩形槽11的兩側(cè)分別設(shè)有若干層對(duì)稱的滑槽111,若干層所述滑槽111由上至下等間距依次設(shè)置,每一層所述滑槽111的正面及背面各存設(shè)有一內(nèi)箱盒2,所述內(nèi)箱盒2包括底盒21、紫外燈23及上蓋22,所述紫外燈23設(shè)于底盒21內(nèi),所述底盒21與上蓋22的一側(cè)通過(guò)合頁(yè)鉸接,所述底盒21與上蓋22的另一側(cè)通過(guò)鎖扣24扣合連接,所述底盒21上設(shè)有推拉把手25,所述底盒21的兩側(cè)分別設(shè)有與滑槽111適配的滑輪211,所述底盒21兩側(cè)的頭部分別設(shè)有與滑槽111適配的滑塊212。如圖1至圖3所示,內(nèi)箱盒2內(nèi)可存放細(xì)胞的培養(yǎng)皿,外箱體1的正面及背面均可存放內(nèi)箱盒2,正背兩面可同時(shí)存放內(nèi)箱盒2的設(shè)計(jì),提高了細(xì)胞培養(yǎng)箱的空間利用率,使得細(xì)胞培養(yǎng)箱在同一占地面積的情況下可存儲(chǔ)更多的細(xì)胞培養(yǎng)皿。存放時(shí),只需將內(nèi)箱盒2的滑輪211對(duì)準(zhǔn)滑槽111,手持在底盒21上的推拉把手25,通過(guò)滑輪211滑動(dòng)的方式,將內(nèi)箱盒2推送至滑槽111內(nèi)。云南模式原代細(xì)胞技術(shù)