導語對于大部分科研人員來說，研究中一般用到均是現成的細胞系/株，我們只需要：進行細胞傳代和保種。然而，這些細胞系常常由于體外長期培養，而丟失原有生物學特性，對藥物處理的反應差距越來越大。因此，原代細胞的地位日漸凸顯，Paper中若有了原代細胞的數據都會添色不少。然而，就小編親生經歷，原代細胞分離著實是個技術活，我們就結合自身經驗，為大家介紹：組織和正常組織的原代細胞的分離與培養方法。部分：原代細胞的基本知識1.什么是原代細胞培養?原代細胞（Primarycells）：是指直接從機體取出的組織或細胞獲得單個細胞并在體外進行培養的細胞。這里的組織主要指：組織、外周血及胚胎等。原代細胞培養：由于原代細胞生長緩慢，繁殖一定的代數停止生長（一般10代以內）。所以一般認為：培養的原代的第1和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。2.原代細胞與細胞系（celllines）的區別原代細胞和細胞系的比較：PrimarycellsCelllines增殖能力較弱強繁殖代數一般只能傳10代以內無限增殖，50代左右遺傳物質完整性遺傳物質未改變遺傳物質發生改變生物特性接近臨床樣本偏離臨床樣本培養容易程度比較復雜簡單。具有多種原代細胞，包含人源細胞、大鼠細胞、小鼠細胞。內蒙古C57原代細胞實驗

⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，用75%酒精清潔臺面。（3）細胞污染的預防①實驗用品防止污染。細胞培養所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌要仔細，并在無菌實驗檢測陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。②操作過程防止污染。③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進入細胞間。④實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全柜之外的物品，必須及時對手套進行消毒。⑤進入細胞培養間后關好門，坐下來盡量少走動以免影響生物安全柜的風簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞，不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內，更不能隨便使用，以免造成大規模污染。⑥細胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口，并將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。⑦實驗操作時生物安全柜的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時不能對著工作區，以免造成不必要的污染。⑧瓶蓋應當倒放在遠離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。⑨不要從敞開的容器口上方經過。湖南大鼠原代細胞技術臍帶是哺乳類連接胎兒和胎盤的管狀結構。

收藏查看我的收藏0有用+1已投票0細胞培養編輯鎖定本詞條由“科普中國”科學百科詞條編寫與應用工作項目審核。細胞培養（cellculture）是指在體外模擬體內環境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。不論對于整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養都是一個必不可少的過程，細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術必不可少的環節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。細胞培養技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術，通過細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。[1]中文名細胞培養外文名cellculture別名細胞克隆術語細胞培養技術地位生物技術中基礎的技術常用培養基無鈣、鎂、離子溶液目錄1分類2環境及條件?環境因素?營養條件3設施器材4一般過程5具體步驟6注意事項細胞培養分類編輯動物細胞培養高速冷凍離心機在所有的細胞離體培養中，困難的是動物細胞培養。

尤其是上皮組織分散效果好。與細胞上的鈣、鎂離子結合形成螯合物后，形成的機械力可使細胞分散。Q：細胞量太少，長不起來怎么辦？A：有幾種辦法，如對沒消化完的組織塊反復消化，盡量多收集一些細胞；并且盡量傳代到小皿里，如6孔板都可以。若是細胞仍太少，應耐心等待，盡量不要傳代，只換液。Q：細胞難以貼壁？A：盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養能否成功的關鍵。為了盡快促進細胞貼壁，可以提前1h將千分之的明膠鋪于培養板。Q：原代細胞培養方法與細胞系不同之處在哪里？A：培養基一般選用RPM1640，DMEM等，建議能加入促生長的物質：如胰島素、氫化可的松、EGF等因子。二、原代正常組織分離皮膚是人體，但長久以來，表皮細胞一種被認為是難以培養的細胞，限制了皮膚生物學基礎研究的發展。作為表皮的主要細胞，角質形成細胞已經成為我們了解皮膚生物學至關重要的許多原創性研究的焦點。下面就介紹下小鼠角質形成細胞的分離和培養。基本過程如下圖：原代小鼠角質細胞的分離步驟實驗結果：分離出的小鼠角質細胞常見問題解答：Q：皮膚組織作為正常組織，與組織分離主要區別在哪里？A：首先，皮膚組織需要用中性分離酶dispaseII將表皮分離出來；其次，在消化時。細胞轉染（Transfection）是指將DNA或者RNA導入真核細胞中的過程。

[1]名稱濃度細菌敏感支原體青霉素100U/ml+++鏈霉素100ug/ml+++慶大霉素50ug/ml+++卡那霉素100ug/ml+++紅霉素50ug/ml++四環素10ug/ml++++多粘菌素50ug/ml++兩性霉素B3ug/ml++制霉菌素50U/ml++截耳素衍生物10ug/ml+++細胞培養設施器材編輯設施：超凈臺、恒溫培養箱、倒置顯微鏡、液氮儲存罐、電熱鼓風干燥箱、冰柜、電子天平、恒溫水浴槽、離心機、壓力蒸汽消毒器。器材：一、玻璃器材無菌室培養皿、滴流瓶、刻度吸管、離心管、培養瓶、燒杯、量筒、三角燒瓶二、塑料器材多孔培養板、培養皿、培養瓶三、橡皮器材橡皮制品（是硅制品）做各種瓶或試管的塞子、蓋子。四、金屬器材剪刀、鑷子、手術刀、解剖刀、血管鉗、組織鑷、眼科鑷及各種型號針頭五、其他物品紗布、注射器和針頭[3]細胞培養一般過程編輯96孔細胞培養吸液一、準備工作準備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，準備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試，具體內容可參閱有關文獻。二、取材在無菌環境下從機體取出某種組織細胞。應用Matrigel模擬機體環境，上面接種**細胞，觀察血管生成情況。湖南大鼠原代細胞技術

轉染的目的是產生重組蛋白，或特異性增強或控制轉染細胞中的基因表達。內蒙古C57原代細胞實驗

下面是它所需要的特殊條件。⑴血清：動物細胞離體培養常常需要血清。常用的是小牛血清。血清提供生長必需因子，如微量元素、礦物質和脂肪。在這里，血清等于是動物細胞離體培養的天然營養液。⑵支持物：大多數動物細胞有貼壁生長的習慣。離體培養常用玻璃，塑料等作為支持物。⑶氣體交換：二氧化碳和氧氣的比例要在細胞培養過程中不斷進行調節，不斷維持所需要的氣體條件。[2]植物細胞培養⑴光照：離體培養的植物細胞對光照條件不甚嚴格，因為細胞生長所需要的物質主要是靠培養基供給的。但光照不但與光合作用有關，而且與細胞分化有關，例如光周期可對性細胞分化和開花調控作用，所以以獲得植株為目的的早期植物細胞培養過程中，光照條件特別重要。以植物細胞離體培養方式獲得重要物質，如藥物的過程，植物細胞大多是在反應器中懸浮培養。⑵植物細胞的分裂和生長特別需要植物的調節，促進生長的生長素和促進細胞分裂的分裂素是基本的。植物細胞的分裂，生長，分化和個體生長周期都有相應的參與調節。和動物細胞相比，植物細胞離體培養對要求的原理已經了解，其應用技術也已相當成熟，已經有一套能使用的培養液。內蒙古C57原代細胞實驗