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ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

來源： 發布時間：2025-08-31

HEK 293細胞來源于人胚腎細胞，廣泛應用于細胞與基因治療領域，如病毒載體的生產等。盡管生物制品會經過一系列純化工藝以去除相關雜質，但殘留的微量宿主細胞蛋白（HCP）仍會引發機體的免疫應答，影響產品的質量和安全。因此，需要對生產工藝中殘留的HEK 293 HCP進行定量檢測，使其符合放行標準。湖州申科生物HEK 293 HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯免疫吸附法）適用于HEK 293和HEK 293T來源的生物制品（重組蛋白類、細胞和基因治療類等）中宿主細胞蛋白的定量檢測。試劑盒檢測步驟少，快速，專一性強，性能穩定可靠。
湖州申科建立宿主特異 HCP 數據庫，支持高風險蛋白準確鑒定與分析。ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

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影響宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測結果的因素之一是操作規范。一方面，實驗人員的專業技能和經驗對檢測結果的準確性有很大影響。熟練的實驗人員能夠準確地進行樣品處理、試劑配制和儀器操作，減少人為誤差。另一方面，一個合理的HCP檢測方法，在開發及應用時，應當考慮操作的合理變動區間（即耐用性）并設置相質控，從程序上盡量消除人為誤差對結果的影響。此外，嚴格遵循標準操作流程（SOP）是確保檢測結果可靠性的關鍵。操作步驟的不規范可能導致結果的重復性差或誤差增大。目前，湖州申科已正式推出全自動化HCP ELISA檢測系統，可以完成從樣品制備、孵育、洗板至數據采集等一系列操作，結合實驗室信息管理系統（LIMS），可以實現“輸入即輸出”，減少流程誤差。
成都宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測供應廠家通用型試劑盒為市售廣譜方案，使用前需嚴格評估抗體對特定 HCP 的覆蓋率。

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宿主細胞殘留蛋白（HCP）檢測是生物制品質量控制的關鍵環節，采用基于抗體的免疫學方法（如ELISA）。然而，不同試劑盒之間的檢測結果常存在明顯差異，關鍵原因在于其依賴的關鍵組分——HCP校準品和檢測抗體——本身制備與表征的高度可變性。校準品作為定量的基準，其復雜性極大。不同供應商在制備時使用的細胞來源、培養及表達條件、宿主蛋白提取純化工藝（例如目標產物去除策略）差異明顯，導致校準品的組成、代表性及穩定性各不相同。同樣，檢測抗體（尤其是多抗）通過免疫動物獲得，其特異性與覆蓋度受免疫原、動物應答個體差異、免疫方案及后續抗體篩選/純化過程的影響巨大，不同批次或來源抗體的識別譜（如對不同HCP的親和力、對低豐度蛋白的靈敏度）存在本質差別。正是這些關鍵組分固有的明顯變異度，導致不同試劑盒對同一樣本的檢測結果在數值上、甚至特定HCP的檢出能力上可能出現較大偏差。因此，為確保檢測結果真實反映自身產品的HCP殘留情況，企業應結合自身產品特性和工藝，對不同試劑盒進行詳細的平行比對與適用性評估，以篩選出匹配度較高的檢測方案。

宿主細胞蛋白來源中往往同時存在核酸，胞膜脂類，培養基中的氨基酸等非HCP成分會干擾總蛋白的檢測準確性，需要在檢測之前進行純化前處理，同時對總蛋白檢測方法進行方法學確認。HCP是一種多蛋白質的混合物，總蛋白定量方法之間檢測結果會存在一定程度的差異，這也是導致HCP免疫檢測方法結果差異的原因之一。若HCP蛋白定量方法間檢測結果差異較大，一般同時采用2種以上經過確認的方法檢測，再取均值。總蛋白檢測方法的定量限一般只能達到μg/mL水平,但是HCP檢測試劑盒的產品校準品在ng/mL水平。從HCP高濃度原液稀釋到低濃度產品校準品中存在稀釋誤差，需要對產品校準品進行重新標定賦值。
不同培養工藝和產物表達影響 HCP 的數量和生化復雜性。

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宿主細胞蛋白殘留檢測抗體覆蓋率評估：法規推薦的方法有兩大類：一類是傳統2D-WB法，另一類是基于抗體親和的免疫捕獲類方法。傳統2D-WB法存在需要蛋白變性，樣品需要前處理（破壞蛋白天然表位）；轉膜效率低；易產生非特異性等缺陷，難以反映真實的覆蓋率水平。湖州申科自主開發了免疫磁珠捕獲分離技術（immunomagnetic beads separation，IMBS)，利用免疫磁珠的半液態性質，可以在懸浮的條件下與HCP樣本充分混勻結合，整個過程蛋白無需變性，結合方式與ELISA檢測條件相似，可以獲得更真實的覆蓋率結果。
HCP檢測的經典方法是ELISA法，但該方法在檢測過程中存在漏檢風險，需要對試劑盒抗體進行抗體覆蓋率評估。成都畢赤酵母宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

HCP抗體能識別工藝中存在的HCP，避免有占優勢的抗體聚集，尤其關注潛在的高風險性HCP的識別能力。ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

美國藥典<1132>章節 和歐洲藥典<2.6.34>章節建議對于即將進入商業化生產的（臨床III期及以后）或生產工藝穩定的生物制品采用定制化ELISA試劑盒進行宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測，原因可能是：①確保檢測方法可以充分覆蓋實際工藝產生的HCPs，避免漏檢關鍵雜質；②支持更準確的免疫原性和安全性評估；③提供真實的工藝表征數據，而非推測數據；④滿足商業化生產質量控制的方法一致性。此外，對目前市場上常見的HCP ELISA商業化試劑盒進行了測試，并與HCP ELISA定制化試劑盒進行對比，實驗結果發現不同商業化試劑盒檢測同一樣品的檢測值差異大，且準確性均低于定制化試劑盒，表明定制化試劑盒更能滿足產品質量控制所需。
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